طراحی سنجش سریع با استفاده از آنتی ژن کایمر نوترکیب طراحی شده در کامپیوتر به منظور تشخیص توامان ابتلاء به هپاتیت b و htlv-1 در نمونه سرمی بیماران مبتلا

در این مطالعه هدف ما طراحی یک سنجش سریع به منظور غربالگری سریع و آسان نمونه¬های سرمی از نظر ابتلاء به هپاتیت b و htlv-i بود. برای این منظور سه آنتی ژن تشخیصی hbc، gp46 و p19 انتخاب گردید. آنتی ژن های انتخاب شده با استفاده از روش های مختلف فیزیکوشیمیایی نقشه¬برداری اپی توپی شدند. قطعات انتخاب شده با لینکرهای اسیدآمینه¬ای (توالی: gsggsg) به هم متصل شده و پروتئین کایمر نوترکیب تشخیصی طراحی گردید. ساختار دوم، سوم، پایداری، نیمه عمر، عملکرد و سایر خصوصیات مربوط به پروتئین طراحی شده محاسبه گردید. ژن مربوط به منظور بیان پروتئین طراحی شده، بهینه سازی شده و بعد از سنتز شیمیایی به درون سلول های مستعدسازی شده bl21 (de3) e.coli وارد شد. نتایج حاصل از sds-page و وسترن بلاتینگ نشان داد که پروتئین مورد نظر به خوبی در سلول های e.coli بیان شده است. پروتئین بیان شده با استفاده از روش های کروماتوگرافی میل ترکیبی و ژل فیلتراسیون در شرایط طبیعی و دناتوره کننده تخلیص گردید. بررسی¬های صورت گرفته با elisa نشان داد که آنتی ژن طراحی شده به صورت وابسته به غلظت با آنتی بادی های موجود در سرم افراد مبتلاء به hbv و یا htlv-i واکنش می دهد. سپس آنتی ژن مورد نظر بر روی کاغذهای نیتروسلولز فیکس شده و سنجش سریع با استفاده از آنتی بادی های anti-human igg نشان¬دار شده با نانوذرات طلاء طراحی گردید. انجام سنجش سریع بر روی 50 نمونه بیمار مبتلاء به hbv، 50 نمونه بیمار مبتلاء به htlv-i و 50 نمونه سالم که نسبت به آنتی بادی های hbv و htlv-i منفی بودند نشان داد که همه نمونه¬های بیماران مبتلاء به htlv-i با این آنتی ژن قابل شناسایی هستند اما 6 نمونه مبتلاء به hbv با روش¬سنجش سریع طراحی شده قابل شناسایی نبودند. براساس نتایج سنجش سریع حساسیت این آنتی ژن برای htlv-i برابر با 100? و برای hbv برابر با 82? و و اختصاصیت سنجش برای تشخیص این ویروس برابر با 86? بود. نتایج حاصل از این بررسی نشان ¬داد که آنتی ژن طراحی شده با ابزارهای کامپیوتری به صورت اختصاصی با آنتی بادی های موجود در خون بیماران واکنش می دهد. لیکن حساسیت پائین مهمترین محدودیت در پیشگویی اپی توپ ها با نرم¬افزارهای کامپیوتری است.